Primero realizaremos una preincubación en medio TSB (Tryptic Soy Broth) durante 24 h a 37ºC. A continuación una incubación en dos medios diferenciados: Baird-Parker con yema de huevo y telurito y Chapman-Manitol. Las dos siembras por agotamiento. Las colonias de S. Aureus en medio Baird-Parker salen negras debido a la precipitación del telurito y con un halo blanco de lipólisis por precipitación de la grasa del huevo.
Las colonias con Chapman Manitol de Staphylococcus Aureus salen de color amarillo por la fermentación del manitol. Otros Staphylococcus como el Staphylococcus Epidermis no fermentan el manitol y se ven de color rojo.
Para comprobar que se trata de la cepa de S. Aureus Enterotoxigénico hemos de realizar dos pruebas confirmatorias bioquímicas: prueba de la DNAasa y de la Coagulasa. En la de DNAasa realizaremos una siembra por estría en una placa preparada previamente con medio agar DNAsa. Tras la incubación durante 24-48 h a 37ºC añadiremos a la placa HCl 1N hasta cubrir. Esperamos unos minutos y veremos si es positiva o negativa. Si es positiva habrá una zona donde no aparecerá precipitado alrededor de la masa bacteriana.
la prueba de la COAGULASA se realizará en un tubo de hemolisis estéril con 0,5 ml de plasma de conejo. Se cogeran 1-2 colonias sospechosas del medio Baird Parker y se incubaran en el tubo a 37ºC durante 18h. Positivo: Aparece un coagulo en el tubo. Hay que tener cuidado ya que una sobreincubación podría dar falsos negativos, ya que el coagulo se reabsorbe.
Suerte, ¡¡ y a ver como salen vuestras placas!!
Sergio
PD: Si no os acordais de como se realizan las siembras os recomiendo entrar aquí.
